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高中生物學
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綜合題
1.
(2022高三上·源城月考)
hTERT基因可引起端粒延長,延長細胞生命周期??蒲腥藛T利用P2A基因?qū)TERT基因和增強型綠色熒光蛋白基因(EGFP基因)連接,使之共表達,從而構(gòu)建出含hTERT-P2A-EGFP目的片段的重組質(zhì)粒,為進一步研究hTERT基因的功能和構(gòu)建永生細胞系奠定基礎(chǔ)。hTERT-P2A-EGFP目的片段的結(jié)構(gòu)和大小如下圖,回答下列問題:
(1) 科研人員首先利用PCR技術(shù)對目的基因hTERT、P2A、EGFR進行擴增。PCR的原理是
,反應(yīng)體系需要提供
種引物,引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的
(填“3′”或“5′”)端開始連接脫氧核苷酸。
(2) 構(gòu)建hTERT-P2A-EGFP目的片段時需使用的工具酶有
,都能作用于
(化學鍵)。
(3) 為了初步鑒定hTERT-P2A-EGFP目的片段是否構(gòu)建成功,科研人員對連接體系中的基因進行擴增,并對擴增產(chǎn)物的大小進行測定。若擴增產(chǎn)物的大小為
,則說明了hTERT基因和EGFP基因已連接到P2A基因上。
(4) 為進一步驗證重組質(zhì)粒是否成功表達,科研人員將受體細胞平均分成A、B兩組,其中A組受體細胞導(dǎo)入重組質(zhì)粒,B組受體細胞導(dǎo)入
。支持“重組質(zhì)粒成功表達”的實驗結(jié)果為:
。
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